(Flow cytometry, FCM) - клеткавы аналізатар, які вымярае інтэнсіўнасць флуарэсцэнцыі афарбаваных клеткавых маркераў. Гэта высокатэхналагічная тэхналогія, распрацаваная на аснове аналізу і сартавання асобных клетак. Ён можа хутка вымяраць і класіфікаваць памер, унутраную структуру, ДНК, РНК, вавёркі, антыгены і іншыя фізічныя або хімічныя ўласцівасці клетак і можа грунтавацца на калекцыі гэтых класіфікацый.
Праточны цытометр у асноўным складаецца з наступных пяці частак:
1 Праточная камера і флюідычная сістэма
2 Лазерная крыніца святла і сістэма фарміравання прамяня
3 Аптычная сістэма
4 Электроніка, сістэма захоўвання, адлюстравання і аналізу
5 Сістэма сартавання клетак
Сярод іх лазернае ўзбуджэнне ў лазернай крыніцы святла і сістэме фарміравання прамяня з'яўляецца асноўным вымярэннем сігналаў флуарэсцэнцыі ў праточнай цытаметрыі. Інтэнсіўнасць узбуджальнага святла і час экспазіцыі звязаны з інтэнсіўнасцю сігналу флуарэсцэнцыі. Лазер - гэта кагерэнтная крыніца святла, якая можа забяспечваць асвятленне адной даўжыні хвалі, высокай інтэнсіўнасці і высокай стабільнасці. Гэта ідэальная крыніца ўзбуджальнага святла для задавальнення гэтых патрабаванняў.
Паміж крыніцай лазера і праточнай камерай знаходзяцца дзве цыліндрычныя лінзы. Гэтыя лінзы факусуюць лазерны прамень з круглым папярочным сячэннем, выпраменьваны лазернай крыніцай, у эліптычны прамень з меншым сячэннем (22 мкм × 66 мкм). Лазерная энергія ўнутры гэтага эліптычнага прамяня размяркоўваецца ў адпаведнасці з нармальным размеркаваннем, забяспечваючы пастаянную інтэнсіўнасць асвятлення клетак, якія праходзяць праз зону выяўлення лазера. З іншага боку, аптычная сістэма складаецца з некалькіх набораў лінзаў, адтулін і фільтраў, якія можна ўмоўна падзяліць на дзве групы: перад і пасля праточнай камеры.
Аптычная сістэма перад праточнай камерай складаецца з лінзы і адтуліны. Асноўная функцыя лінзы і дзіркі (звычайна дзвюх лінз і дзіркі) заключаецца ў факусіроўцы лазернага прамяня з круглым папярочным сячэннем, выпраменьванага лазернай крыніцай, у эліптычны прамень з меншым папярочным сячэннем. Гэта размяркоўвае энергію лазера ў адпаведнасці з нармальным размеркаваннем, забяспечваючы пастаянную інтэнсіўнасць асвятлення клетак па ўсёй зоне выяўлення лазера і мінімізуючы перашкоды ад рассеянага святла.
Ёсць тры асноўных тыпу фільтраў:
1: Фільтр доўгага праходжання (ФНЧ) - прапускае толькі святло з даўжынямі хваль вышэй за вызначанае значэнне.
2: Фільтр кароткага праходжання (SPF) - прапускае толькі святло з даўжынямі хваль ніжэй пэўнага значэння.
3: Паласавы фільтр (BPF) - прапускае святло толькі ў пэўным дыяпазоне даўжынь хваль.
Розныя камбінацыі фільтраў могуць накіроўваць сігналы флуарэсцэнцыі на розных даўжынях хваль на асобныя фотаўмножальнікі (ФЭУ). Напрыклад, фільтры для выяўлення зялёнай флуарэсцэнцыі (FITC) перад ФЭУ - гэта LPF550 і BPF525. Для выяўлення аранжава-чырвонай флуарэсцэнцыі (PE) перад ФЭУ выкарыстоўваюцца фільтры LPF600 і BPF575. Фільтры для выяўлення чырвонай флуарэсцэнцыі (CY5) перад ФЭУ - гэта LPF650 і BPF675.
Праточная цытаметрыя ў асноўным выкарыстоўваецца для сартавання клетак. З развіццём камп'ютэрных тэхналогій, развіццём імуналогіі і вынаходніцтвам тэхналогіі моноклональных антыцелаў яе прымяненне ў біялогіі, медыцыне, фармацыі і іншых галінах становіцца ўсё больш шырокім. Гэтыя прыкладанні ўключаюць аналіз дынамікі клетак, апоптоз клетак, тыпаванне клетак, дыягностыку пухлін, аналіз эфектыўнасці лекаў і г.д.
Час публікацыі: 21 верасня 2023 г
